Detección de microorganismos en agua según la norma UNE-EN ISO 8199

La norma UNE-EN ISO 8199 recoge requisitos y orientaciones generales para realizar el análisis microbiológico del agua mediante técnicas de cultivo. Su contenido aborda las operaciones comunes de estos métodos, como la preparación de las muestras, los medios de cultivo y el material de laboratorio, además de las técnicas disponibles para la detección y el recuento de microorganismos.

Este marco de trabajo puede aplicarse al análisis de agua destinada al consumo, agua procedente de procesos industriales, aguas residuales y aguas recreativas cuando sea necesario identificar o cuantificar microorganismos como bacterias, virus y hongos.

Preparación y análisis microbiológico de las muestras de agua

Un ejemplo de procedimiento para la preparación y el análisis de las muestras incluye las siguientes etapas:

• Recoger las muestras de agua en frascos estériles.
• Filtrar la muestra para eliminar macropartículas, cuando resulte necesario.
• Transferir un volumen de entre 100 y 500 mL a un tubo de ensayo y centrifugarlo a una velocidad de entre 3.000 y 5.000 rpm durante 10-15 minutos.
• Resuspender el sedimento obtenido en una pequeña cantidad de agua estéril.
• Realizar los análisis microbiológicos correspondientes, como la siembra en un medio de cultivo, la incubación y la posterior cuantificación de las colonias.
• Analizar e interpretar los resultados obtenidos.

La recogida de la muestra y su preparación deben realizarse bajo condiciones que reduzcan el riesgo de contaminación externa y permitan conservar la representatividad del agua analizada. Tras la concentración de los microorganismos, el sedimento resuspendido puede utilizarse en las técnicas microbiológicas seleccionadas para cada tipo de muestra y objetivo analítico.

Preparación de muestras mediante centrifugación

La centrifugación de muestras de agua puede utilizarse para concentrar los microorganismos sedimentables presentes en un volumen reducido. Esta operación resulta especialmente útil cuando la concentración microbiana inicial es baja y puede dificultar su detección o cuantificación mediante los métodos microbiológicos posteriores.

Durante el proceso, las partículas y los microorganismos capaces de sedimentar bajo las condiciones de centrifugación aplicadas se desplazan hacia el fondo del recipiente. Tras retirar el sobrenadante y resuspender el sedimento, se obtiene una fracción concentrada que puede emplearse en operaciones posteriores, como la siembra en medios de cultivo, la incubación y el recuento de colonias.

La centrifugación también permite fraccionar parte de los sólidos suspendidos presentes en la muestra. No obstante, algunos microorganismos pueden encontrarse asociados a estas partículas y sedimentar junto con ellas. Por este motivo, las condiciones de centrifugación deben seleccionarse de acuerdo con el tipo de microorganismo, la naturaleza de la muestra y el método microbiológico aplicado.

Para esta aplicación, la centrífuga Digtor 22 de Ortoalresa ofrece una capacidad máxima de 4 × 750 mL, según el rotor y los adaptadores instalados. Esta configuración permite trabajar con los volúmenes de muestra de 100 a 500 mL descritos en el procedimiento, facilitando la concentración de los microorganismos presentes en el agua antes del análisis microbiológico.