Aislamiento de PBMCs para análisis de expresión génica.

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) son una población heterogénea de células sanguíneas nucleadas, que comprenden linfocitos, monocitos, y células dendríticas.

Debido a que estas células se obtienen de manera menos invasiva que las biopsias, se han empleado en la búsqueda de biomarcadores en numerosas patologías. En concreto, el perfil de expresión génica de las PBMCs ha demostrado ser un reflejo de los eventos fisiológicos y patológicos que ocurren en distintos tejidos de nuestro organismo, habiéndose relacionado la expresión de ciertos genes en las PBMCs con el desarrollo de patologías como el cáncer de próstata o la diabetes. 

El gradiente de densidad con Lymphoprep™

Para analizar la expresión génica de las PBMCs, lo primero que se debe hacer es aislar dichas células de la muestra de sangre total que se toma del paciente. El gradiente de densidad con Lymphoprep™ es uno de los métodos más usados para ello. 

Para este método, 15mL de sangre total se diluyen con 15mL de tampón salino suplementado con suero bovino fetal. Los 30mL de sangre diluida se depositan cuidadosamente en un tubo de 50mL que contiene 15mL de Lymphoprep™. Luego, el tubo de 50mL se centrifuga a 800 G durante 20 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC). 

Nuestras centrífugas Unicen 21 y Digicen 21 universales por concepto, con capacidades máximas de 4 x 100 ml se adaptan perfectamente a los requerimientos de este paso de centrifugación.

Resultado de esta centrifugación, las células se dividen en 4 capas en función de su densidad, que de abajo a arriba son: capa con eritrocitos, capa con Lymphoprep™, capa con PBMCs y capa con plasma. Así, tras la centrifugación se deshecha la capa de suero para tener acceso a la capa de PBMCs, que es la que nos interesa. La capa de PBMCs se recoge, y se almacenan las células para su posterior uso.

Finalmente, a partir de estas PBMCs aisladas se procedería a la lisis celular y al aislamiento del ARN, y se analizaría el perfil de expresión génica de dichas células, con la técnica que se considerase más oportuna en cada caso.

La centrifugación con gradiente de densidad es uno de los métodos más usados para aislar PBMCs a partir de una muestra de sangre total, tanto por la comodidad de la técnica, ya que consta de pocos y sencillos pasos, como por la accesibilidad a la hora de tomar la muestra de sangre.