Detección Molecular de Helicobacter Pylori: Técnicas, Procedimientos y Relevancia del ARN Bacteriano

Helicobacter pylori es una bacteria que infecta aproximadamente a 4.4 billones de personas en el mundo. A pesar de que la mayoría de los individuos infectados permanecen asintomáticos, aquellos que desarrollan los síntomas pueden padecer desde condiciones leves, hasta condiciones graves como úlceras de estómago, o el desarrollo de ciertos adenocarcinomas o linfomas.

Técnicas de detección molecular de Helicobacter pylori

Existen distintas técnicas moleculares para la detección de la infección por Helicobacter pylori, siendo las más empleadas la secuenciación masiva (NGS) o los microarrays. Ambas técnicas requieren como primer paso una biopsia de estómago, seguida de una extracción y purificación del ARN bacteriano. Brevemente, los pasos serían:

1. Toma de muestra mediante endoscopia, y congelación a -80ºC hasta su procesamiento
2. Descongelación y lisis del tejido:

• En un tubo de 2mL, añadir los reactivos de lisis según el método de elección, agitar durante 20s, y centrifugar 3 min a máxima velocidad en una microcentrífuga.
• Recoger el sobrenadante y almacenar a -80ºC

3. Descongelación y purificación del ARN:

• Consta de varios pasos secuenciales en los que se emplea varios reactivos (etanol, DNasa, agua, etc) que permiten el aislamiento del ARN de interés. Entre paso y paso, el tubo de 2mL se agita y se centrifuga entre 30s y 2 min a 8.000xG.
• El ARN resultante se transfiere a un nuevo tubo de 2mL para realizar los análisis oportunos (NGS o microarray).

Importancia de la purificación adecuada del ARN

La correcta purificación del ARN bacteriano es esencial para obtener unos resultados fiables y exactos en el diagnóstico de infección por Helicobacter pylori, y en este proceso, juega un papel importante la microcentrifugación en cadena, por su rapidez y comodidad a la hora de manipular muestras de pequeño tamaño.

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