Producción de anticuerpos de uso terapéutico a gran escala para la industria farmacéutica

La cromatografía es una técnica que permite la separación, identificación, y en ocasiones el análisis de los diferentes compuestos químicos que componen una mezcla compleja.

Brevemente, el fundamento de esta técnica consiste en hacer pasar la mezcla, contenida en un medio (fase móvil), por una matriz sólida que se encuentra acoplada al sistema (fase estacionaria). Así, en función de la composición química de las fases, habrá ciertas moléculas que tengan mayor afinidad por la fase móvil y otras que tengan mayor afinidad por la fase estacionaria. Las primeras, por tanto, se moverán por el sistema a mayor velocidad que las segundas, permitiéndose así su separación y detección.

Cromatografía de afinidad ¿en qué consiste?

Existen distintos tipos de cromatografía, con diferentes aplicaciones en distintos campos de estudio. Uno de los tipos más usados es la cromatografía de afinidad, que se emplea generalmente para la purificación de enzimas, hormonas, anticuerpos, ácidos nucleicos y proteínas específicas. 

Brevemente, para este tipo de cromatografía, se hace pasar una solución que contiene la molécula de interés (fase móvil) por una columna formada por una matriz sólida que lleva acoplado un ligando específico (fase estacionaria). La molécula de interés reconocerá el ligando y se unirá a él por afinidad, quedando retenida en la columna para posteriormente ser eluida.  

Una de las aplicaciones de la cromatografía de afinidad es la producción a gran escala de anticuerpos de uso terapéutico, proceso cada vez más extendido en la industria farmacéutica debido a los buenos resultados obtenidos con este tipo de terapias en diversas enfermedades, como las autoinmunes o el cáncer.

Este proceso consta de 4 pasos

1. Diseño y ampliación del vector de ADN, que contiene la información que codifica para el anticuerpo que interesa producir.
2. Transfección de líneas celulares, para que se exprese el ADN.
3. Producción a gran escala del anticuerpo en cultivos celulares.
4. Purificación del anticuerpo por cromatografía de afinidad.

Más en detalle, para el paso 3, las células transfectadas se cultivan en 100 ml de caldo de cultivo y en condiciones óptimas para su crecimiento. 

Cuando la viabilidad celular sea inferior al 80%, los cultivos se centrifugarán a 3.000 G durante 15 minutos, tras los cuales se recoge y se filtra el sobrenadante de los cultivos, que debe contener los anticuerpos producidos por las células, así como otras moléculas que hayan excretado las células durante su crecimiento. 

Este sobrenadante se almacena en frío, hasta que se realice la purificación de los anticuerpos mediante cromatografía de afinidad, que sería el paso 4.

La cromatografía de afinidad es una técnica especialmente importante en la industria farmacéutica, pues permite la producción de anticuerpos de uso terapéutico a gran escala. 

Para que esta técnica tenga éxito, se debe realizar un paso intermedio de centrifugación con un equipo como la centrífuga universal Digicen 21 y su rotor para trabajar con muestras de 100 ml, que puede programarse desde 100 hasta más de 4.000 g.