Análisis del nivel de bilirrubina en suero mediante colorimetría

La bilirrubina resulta de la degradación del grupo hemo, un componente que forma parte de la hemoglobina (Hb), presente en glóbulos rojos, así como de otras hemoproteínas, como la mioglobina, los citocromos y la catalasa. 

Cuando los glóbulos rojos se encuentran en senescencia, se degradan liberando al torrente sanguíneo la Hb. Luego, el grupo hemo de esta Hb se oxida y se transforma en biliverdina, que a su vez se reduce para dar lugar a la bilirrubina libre. 

Por último, la bilirrubina libre se conjuga con albúmina y viaja hasta el hígado, dónde se procesa para finalmente excretarse a la vesícula biliar. Allí permanece almacenada hasta que se requiere para el proceso de digestión.

Concentración de Bilirrubina

En condiciones normales, la mayor concentración de bilirrubina se encuentra en la vesícula biliar, seguido del hígado y finalmente del plasma.

Concentraciones altas de bilirrubina en plasma (hiperbilirrubinemia) podrían indicar un desajuste en el metabolismo de la bilirrubina por parte del hígado, relacionándose en consecuencia con diferentes enfermedades hepáticas y hemolíticas. Así, la valorización del nivel de bilirrubina en suero se realiza de manera rutinaria en exámenes médicos, para comprobar la funcionalidad del hígado.

Método colorimétrico

Existen distintos métodos para valorar la bilirrubina en suero, siendo el más habitual el método colorimétrico. 

Brevemente, este método emplea un reactivo, el ácido sulfanílico diazotado, que transforma la bilirrubina en azobilirrubina coloreada, permitiendo su detección con un espectrofotómetro. Así, la intensidad del color formado será proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra.

No obstante, previo a la realización de este protocolo, es necesario aislar el suero de la sangre total de los pacientes. Para ello, se toma una muestra de sangre en un tubo de extracción de sangre de 5 mL sin anticoagulante y se centrifuga a 1.500 G durante 15 minutos a temperatura ambiente. La Digicen 22 R es la mejor opción para realizar el aislamiento del suero debido al control preciso de la temperatura que se logra durante la centrifugación. Además, cuenta con nuestro REI System que permite instalar y bloquear el rotor de forma rápida y segura sin necesidad de herramientas.  

Tras la centrifugación, la muestra se divide en dos fracciones. La fracción superior, de aspecto claro y transparente, corresponde al suero sanguíneo, que se traspasa a otro tubo para comenzar el protocolo de valoración de la bilirrubina. 

La valoración de la bilirrubina en suero se realiza de manera rutinaria en clínica, y tiene especial importancia en pacientes con enfermedad hepática. Se realiza generalmente con un método colorimétrico, previo al cuál se debe aislar el suero del paciente mediante un paso de centrifugación.