Análisis de los linfocitos para relacionarlos con el rechazo en pacientes trasplantados

El trasplante renal es el tratamiento de elección para los pacientes que sufren Enfermedad Renal Crónica y se asocia con una mayor supervivencia y una mejor calidad de vida en comparación a aquellos pacientes que no han recibido trasplante y permanecen en diálisis. 

En las últimas décadas, gracias a los avances de la medicina, la supervivencia del injerto renal a corto y medio plazo ha mejorado notablemente, sin embargo, la supervivencia del injerto a largo plazo no ha mostrado mejoras significativas, siendo el rechazo mediado por anticuerpos (AMR) la causa más probable de pérdida del injerto tras el primer año post-trasplante.

El papel de las células cTfh en la producción de anticuerpos

En la producción de los anticuerpos tienen un papel fundamental las células T cooperadoras foliculares (Tfh), ya que inducen la diferenciación de las células B a células productoras de anticuerpos. Las Tfh se localizan generalmente en los órganos linfoides secundarios (SLO), sin embargo, en 2011 se describieron las células Tfh circulantes (cTfh), que son células Tfh que se localizan en sangre periférica.

Así, dado el ya explicado papel de las células cTfh en la producción de anticuerpos, podría resultar interesante, desde un punto de vista clínico y de prevención, analizar los niveles de cTfh en sangre periférica de pacientes trasplantados renales. De este modo, los pacientes con niveles de cTfh más altos en sangre periférica serían más propensos a sufrir rechazo agudo mediado por anticuerpos, que aquellos pacientes con niveles bajos de dichas células.

La citometría de flujo para realizar el análisis de los linfocitos.

El análisis de los linfocitos cTfh se puede realizar mediante citometría de flujo, siendo necesario aislar primero las células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) mediante gradiente de densidad con LymphoprepTM.

Para este método, 15mL de sangre total se diluyen con 15mL de tampón salino sumplementado con suero bovino fetal. Los 30mL de sangre diluida se depositan cuidadosamente en un tubo de 50mL que contiene 15mL de LymphoprepTM. Luego, el tubo de 50mL se centrifuga a 800 G durante 20 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC). Este paso de centrifugación se puede realizar con un equipo universal, ventilado como la Unicen 21 que dispone de un control que permite definir la manera de trabajar más allá de los valores de funcionamiento.

Resultado de esta centrifugación, las células se dividen en 4 capas en función de su densidad, que de abajo a arriba son: capa con eritrocitos, capa con LymphoprepTM, capa con PBMCs y capa con plasma. Así, tras la centrifugación se desecha la capa de suero para tener acceso a la capa de PBMCs, que es la que nos interesa. Finalmente se recoge la capa de PBMCs, y las células se marcan con los anticuerpos óptimos para analizar las cTfh en el citómetro de flujo.

El análisis de las células cTfh por citometría de flujo resulta un parámetro interesante para prevenir el rechazo mediado por anticuerpos en pacientes trasplantados renales, y para ello, las PBMCs deben ser aisladas previamente mediante centrifugación con gradiente de densidad.